活性氧檢測使我們在細(xì)胞研究中非常重要的一個實驗，檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平對于理解一些藥物作用的信號通路和潛在作用機(jī)制具有重要意義。

活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也稱ROS Assay Kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的試劑盒。

DCFH-DA是比較常用的醫(yī)腫活性氧檢測探針，探針本身沒有熒光，可以自由出入細(xì)胞，當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)后，會被脂酶水剪成DCFH，DCFH是有熒光的，通過488nm（藍(lán)光）激發(fā)之后，使用FITC（525nm）熒光通道進(jìn)行檢測，觀測陽性比例以及mean值的變化來反應(yīng)被氧化的水平~

碧云天活性氧檢測試劑盒(S0033S)提供了活性氧陽性對照試劑Rosup，以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物(compound mixture),濃度為50mg/ml。

使用說明：

1. 裝載探針

對于刺激時間較短(通常為2小時以內(nèi))的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。

2. 檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

3. 參數(shù)設(shè)置

使用488nm激發(fā)波長，525nm發(fā)射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強(qiáng)弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測DCF。

4. 其它說明

陽性對照可以按照1:1000的比例使用。例如裝載好探針的細(xì)胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照刺激。通常刺激后20-30分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細(xì)胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可以適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可以適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度。

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