細胞凋亡簡介
細胞凋亡分為病理性凋亡和生理性凋亡兩種,生理性凋亡由遺傳控制,受既定程序(或基因)調(diào)控,屬于程序性的細胞死亡;病理性凋亡是非遺傳控制的細胞的意外壞死,區(qū)別于細胞壞死。
流式細胞檢測原理
細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上發(fā)生特征性改變。由于凋亡細胞核的改變,熒光染料對凋亡細胞的DNA可染性發(fā)生改變,主要是DNA可染性的降低。凋亡細胞形態(tài)的改變影響光的散射性,在流式細胞儀中,散射光有兩種:前散射光和側散射光,前散射光與細胞的大小有關,側散射光與細胞內(nèi)顆粒多少有關,反應的是細胞內(nèi)光的散射情況。
Annexin-V是一種分子量在35~#6kDa的鈣離子依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine PS)高親和力特異性結合,以標記的FITC的Annexin-V作為探針,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡。PI是一種核苷酸,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡的中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過而使細胞核染成紅色,將Annexin-V與PI匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開。
實驗室檢測流程
1、收集細胞
2、洗滌細胞
3、預冷的70%乙醛固定細胞
4、PBS細胞重懸
5、細胞過濾
6、PI染色,4℃避光30min
結果判斷
PI用氬離子激發(fā)熒光,激發(fā)光波長為488 nm,發(fā)射光波長大于630 nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強度的直方圖也可分析前散射光對側散射光的散點圖。
檢測示例
客戶提供
1、實驗信息,包括細胞類型,細胞處理藥物和條件。
2、實驗結果要求等。
服務流程
1、提交項目課題相關需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術團隊討論項目細節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進行修改。
4、雙方均滿意并達成一致,簽訂技術服務合同。
5、開展實驗,按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結題,提供實驗原始結果和分析結果、實驗流程、實驗條件等等。
我們的優(yōu)勢
1、提供各種實驗材料和儀器,滿足項目課題實驗需要。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實驗室。
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